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PCR產物的克隆-DNA回收實驗步驟

PCR產物的克隆-DNA回收實驗步驟【實驗原理】1.DNA片段回收方法：DNA片段在適當濃度的瓊脂糖凝膠中，通上一定電壓進行電泳，不同大小的DNA分子由于遷移率的不同而分離開。切下帶有所需DNA片段的凝膠，用凍融法、玻璃奶回收法或商品化膠回收試劑盒將目的片段回收純化。2.利用Taq酶能夠在PCR產物的3’末端加上一個非模板依賴的A，而T載體是一種帶有3’T突出端的載體，在連接酶作用下，可以把PCR產物插入到質粒載體的多克隆位點，可用于PCR產物的克隆和測序。商品化的T載體有很...

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實時熒光pcr檢測DNA濃度常用的生物試劑

實時熒光pcr檢測利用熒光分析法用特定結合DNA的染料來測定DNA的濃度。常用的DNA染料包括溴化乙錠、Hoechst33258、SYBRGreenI和II、SYBRGold及PicoGreen。溴化乙錠溴化乙錠含有三環菲嚏平面環系統，可嵌入到雙鏈DNA堿基之間。嵌入DNA雙螺旋后，溴化乙錠的菲嚏環平面位于與螺旋軸相垂直的位置，并通過范德瓦耳斯力與上下堿基結合。而其平面環系統被埋在底部，其外側的苯基和乙烷基處于DNA雙螺旋的大溝內。在高強度離子溶液的飽和狀態，大約每2.5個堿...

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熒光定量pcr常見問題的可能原因與解決方案

熒光定量pcr常見問題的可能原因與解決方案無Ct值或Ct值延遲出現:擴增曲線信號不佳，曲線不平滑:標準曲線線性差。1.擴增產物大小不合適：實時熒光定量PCR擴增片段的長度通常在80-150bp之間，如果調整反應的時間有可能擴增500bp的片段。2.PCR反應過程中退火及延伸的時間過短或過長：應根據擴增片段的大小予與調整。3.MgCl,濃度不合適：按0.5mm的間距調整MgCI2的濃度。4.循環數設置不足：最少設置35個循環，可以增加到45個循環。超過45個循環以上背景信號會增...

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消毒和滅菌的區別

微生物行業及微生物實驗室經常會用到消毒、滅菌和清潔那么清潔、消毒和滅菌的區別是什么呢？滅菌滅菌的定義是破壞或消除所有形式的微生物生命的過程，并通過物理或化學方法在設施中進行。加壓蒸汽、干熱、EtO氣體、過氧化氫氣體等離子體和液體化學品是醫學環境設施中使用的主要消毒劑。其實滅菌和消毒是有區別的，一些衛生專業人員以及技術和商業文獻將“消毒”稱為“滅菌”，將物品稱為“部分無菌”。當化學品被用來破壞所有形式的微生物生命時，它們可以被稱為化學消毒劑。這些用于較短暴露時間的相同殺菌劑也可...

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季銨鹽類消毒劑是什么

季銨鹽類消毒劑是什么？季銨化合物廣泛用作消毒劑。季銨鹽是較好的清潔劑，但高硬度的水和棉和紗布墊等材料會使它們的殺菌性降低，因為不溶性沉淀物或棉布和紗布墊分別吸收了活性成分。季銨化合物與其他幾種消毒劑（例如酚類物質、碘伏）一樣，革蘭氏陰性菌可以在其中存活或生長。季銨化合物消毒劑的化學性質在化學上，季銨鹽是有機取代的銨化合物，其中氮原子的化合價為5，其中四個取代基(R1-R4)是給定大小或鏈長的烷基或雜環基，第五個(X-)是鹵化物、硫酸鹽或類似的自由基.每種化合物都表現出自己的抗...

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